Dieser Praktikumsteil dient der Einführung in die Arbeit mit Mikroorganismen und den dafür nötigen Geräten:

• Herstellung von Fest- und Flüssigmedien
• Steriles Arbeiten unter der Cleanbench
• Kultivierung von Mikroorganismen im Schüttelkolben
• Mikroskopie und Zellzählung
• Biomassebestimmung über Biotrockenmasse bzw. mittels Photometer

In diesem Block soll die Bedienung und Regelung eines Fermenters und die Überwachung einer Kultivierung geübt werden. Dabei werden Betriebsparameter des Fermenters eingestellt und eine Zellzucht von der Vorkultur bis zur Zellernte durchgeführt:

• Vorbereitung einer Kultivierung (Autoklavieren, Animpfen etc.)
• Betriebsparameter für eine Submerskultivierung (pH-Wert, T, kLa-Wert)
• Überwachung des Wachstums von Mikroorganismen (Biotrockenmasse, Stoffwechsel)

Ziel des Versuches ist es, mit Hilfe verschiedener Aufreinigungsschritte ein Enzym (z. B. Alkoholdehydrogenase) aus einem Mikroorganismus (z. B. Saccharomycescerevisiae) zu isolieren. Ausgehend vom Rohextrakt des Zellaufschlusses werden unterschiedliche Methoden angewandt, welche jeweils die Reinheit des zu isolierenden Enzyms sukzessiv erhöhen:

• Zellaufschluss
• Hitzedenaturierung von Proteinen
• Aussalzen von Proteinen
• ChromatographischeProteinaufreinigung
• Affinitätschromatographie